单细胞转录组测序（scRNA-seq）技术作为一项革命性的生物学工具，让人们更直观的认识到不同的细胞亚群和状态。但由于冻存组织无法制备高质量的细胞悬液以及细胞形状不规则，细胞体积较大的样本无法直接通过scRNA测序来分析。

这时，单细胞水平上的核转录组测序（snRNA-seq）应运而生，带来了一种新的解决方案。单细胞核转录组测序就是把组织抽核，制备成单细胞核悬液进行核转录组测序。大大减少了样本处理的难度，加速了人类对疾病发生发展探索的步伐。强强联合，助力单细胞核测序时代

 

实验步骤

1) 将新鲜冷冻的人脑组织进行解离并过滤制成核悬液。

2) 使用单细胞柔性分选系统Pala 进行核分选后，进行计数和成像以确定细胞数量和碎片清除效率。

3) 计数后的核稀释至300,000个/ml , 每次添加600μl悬液至Pala细胞芯片中，进行大量细胞分选模式。分析并根据FSC（前向散射）/ALL（轴向光损失）和FSC/PI图表对核进行门控，以去除双联体和碎片。

4) 加载到10X Genomics进行文库制备和测序

 

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实验结果

1) 对比来自解离的大脑核图像发现，经过单细胞柔性分选系统Pala后的组织样本成功清除了碎片。

2) Pala与标准样本的统计数据对比，发现经过Pala分选后的细胞数量更多，每个细胞的平均读数更低，每个样本的总读数更多，测序饱和度更低。

3) 从结果图中看到，标准样本主要由少突胶质细胞主导，而Pala测序显示出更多的集群和更均匀的细胞类型分布。

相较于传统核样本准备方法，单细胞柔性分选系统Pala提供了以下优势：

轻柔分选

＜2si 的鞘液压力，减少了对细胞的物理损伤，特别是脆弱的细胞类型，如神经细胞。

去除细胞聚集体和碎片

Pala能够有效去除细胞聚集体和大小不一的碎片，这对于提高后续测序步骤中获得高质量数据至关重要。

高细胞恢复率

Pala分选的样本比标准样本多产生了10%的细胞，这表明Pala在分选过程中能够更有效地恢复细胞。

简化操作流程

Pala的设置和操作相对简单，使得用户能够快速上手并进行实验，减少了因操作复杂性带来的技术障碍。

减少实验时间和成本

与传统的FACS相比，Pala的简化流程和较低的运行成本

适用于多种样本类型

适用于多种类型的细胞和核样本，包括那些难以通过传统方法分离的细胞类型。

灵活分选

提供三种分选模式，包括单细胞分选，稀有细胞富集，大量细胞分选

总的来说，单细胞柔性分选平台Pala 和 10X Genomics强强联合，为单细胞RNA测序提供了一个高质量、高效率的样本准备方案。

 

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